Requerimientos sobre Validación de Métodos
en el marco de la Acreditación de Laboratorios
según la norma ISO 17025
Disertante:
Lic. Pablo Álvarez
Calidad y Competitividad
INTI-Química

Guías de referencia
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
EURACHEM www.eurachem.org
The Fitness for Purpose of Analytical Methods - A
Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics
(1998)
Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement -
2nd Edition (2000)
Guide to Quality in Analytical Chemistry – An Aid to
Accreditation (2002)

Guías de referencia
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
IUPAC
Harmonized Guidelines for Single-Laboratory
Validation of Methods of Analysis - 2002
www.iupac.org
Nomenclature in Evaluation of Analytical Methods
including Detection and Quantification Capabilities
(IUPAC Recommendations 1995)

Guías de referencia
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Validation of Analytical Procedures:
Text and Methodology – Q2(R1) - 2005
www.ich.orgICH

¿Qué es validar?
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
ISO/IEC 17025:2005
Confirmación, mediante el examen y el aporte
de evidencias objetivas, de que se cumplen los
requisitos particulares para un uso específico
previsto.
Definición:

¿Qué se puede validar?
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
? Métodos analíticos
? Métodos de control de limpieza
? Equipos e instalaciones
? Procesos
? Programas de computación
? Personal

¿Cómo se valida un método de ensayo?
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
? Estudio colaborativo
“Collaborative study”
Existen dos formas de validar un método de ensayo:
? Un solo laboratorio
“In-house validation”
“Single-laboratory validation”

¿Cómo se valida un método de ensayo?
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
validar el método
evaluar el método
FIN
SI
ajustar el
método
NO
establecer requisitos
¿apto para el
propósito?

¿Cómo se valida un método de ensayo?
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Aptitud
para el
propósito
evaluación
global de los
parámetros de
validación
evaluación de
los parámetros
en forma
individual
criterios para
cada parámetro
incertidumbre
de medición
⇒

Parámetros típicos de validación
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
? Selectividad (Especificidad)
? Linealidad
? Límite de Detección
? Límite de Cuantificación
? Precisión
? Veracidad (Exactitud)
? Rango
? Robustez
? Incertidumbre de Medición

Selectividad
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Definición
Capacidad de un método para cuantificar
exactamente un analito en presencia de
interferencias
IUPAC

Selectividad
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Una interferencia es aquella especie química que causa
un error sistemático en la determinación de un analito.
Se pueden dar dos casos:
? la presencia de interferencias que puedan dar una
respuesta analítica que no se diferencie de la
respuesta del analito.
? la presencia de interferencias que afecten la señal del
analito (“efecto matriz”)
¿Qué es una interferencia?

Selectividad
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
¿Cómo se evalúa?
• Un blanco de reactivos
• Una matriz natural o sintética libre de analito
• Analito en un solvente adecuado
• La misma matriz con el agregado de una cantidad
conocida de analito o una muestra real
• Potenciales interferencias en presencia de analito
Análisis simultáneo de:

Linealidad
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Capacidad de un método analítico de
producir resultados que sean directamente,
o por medio de una transformación
matemática definida, proporcionales a la
concentración de analito en la muestra.
ICH
Definición

Linealidad
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Recomendaciones
• Cantidad de puntos: ≥

6 concentraciones
• Igualmente espaciados
• Cantidad de replicados por concentración: ≥

3
• Replicados independientes
• Usando analito puro o analito en matriz
• Medidos aleatoriamente

Linealidad
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
? Evaluación visual
? Evaluación estadística (cuadrados mínimos)
? Gráfico de los residuos
? Coeficiente de correlación (R)
? Ordenada al origen y pendiente
Evaluación

Linealidad
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
A partir de la información obtenida en la evaluación de la
linealidad, se determinará la estrategia a utilizar en el
método de rutina. Puede ser que sólo sea necesario
calibrar con un punto o tal vez con dos puntos. En otros
casos será necesario calibrar con varios puntos.
Es importante tener en cuenta que los siguientes
parámetros de validación, en particular la precisión y la
veracidad, sean evaluados utilizando la estrategia de
calibración que se usará en el procedimiento elegido.
Evaluación

Límites de Detección y de Cuantificación
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
LD :
Menor concentración de analito en una muestra
de ensayo que puede ser confiablemente
distinguida del blanco.
EURACHEM
Definiciones
LQ :
Menor concentración de analito en una muestra que
puede ser determinada con un aceptable nivel de
incertidumbre.

Límites de Detección y de Cuantificación
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
LD = 3 . s
Métodos de determinación
s = desviación estándar de un blanco o de
una muestra fortificada a baja concentración
LQ = 10 . s
Si bien existen diferentes metodologías para calcular los
límites de detección y cuantificación, la más utilizada es la
siguiente:

Límites de Detección y de Cuantificación
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
IMPORTANTE
Cuando sea necesario establecer la posible
presencia o ausencia de un componente en una
muestra, el resultado del ensayo nunca deberá
contrastarse con el límite de detección (LD ).
En este caso, el parámetro indicado es el llamado
Límite o Nivel crítico (Lc ).
Además, se recomienda informar “no detectado”
y evitar hacer declaraciones como “ausente”,
“ausencia” o “no contiene”.

Errores aleatorios y sistemáticos
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Definiciones (VIM 2008)
error de medición: diferencia entre el resultado de
una medición y un valor de referencia.
error aleatorio: componente del error de medición
que, en mediciones repetidas, varía de forma
impredecible.
error sistemático: componente del error de medición
que, en mediciones repetidas, permanece constante
o varía de forma predecible.

Errores aleatorios y sistemáticos
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
x xverdadero
del mesurando
xi
error sistemático
(bias)
error
aleatorio
error de la
medición xi
x
Error de medición

Errores aleatorios y sistemáticos
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
errores aleatorios
Precisión
“Precision”
errores sistemáticos
Veracidad
“Trueness”
Exactitud
“Accuracy”

••••• •
• •
• •• •••••
•
•
•
•
•
•
•
•
•
• • •
•••
•
Errores aleatorios y sistemáticos
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
error aleatorio
e
r
r
o
r

s
i
s
t
e
m
á
t
i
c
o
requisito 1
requisito 2
ex
ac
titu
d
precisión
v
e
r
a
c
i
d
a
d

Precisión
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Grado de concordancia entre resultados
obtenidos en mediciones repetidas de un mismo
objeto o de objetos similares, bajo condiciones
especificadas
VIM 2008
Definición

Precisión
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Diferentes condiciones
? Repetibilidad
? Precisión intermedia
? Reproducibilidad

Precisión
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Evaluación
La precisión de un método de ensayo se expresa
cuantitativamente como “imprecisión” a través del
cálculo de la desviación estándar de una serie de
resultados (s).
En una validación es conveniente evaluar la
precisión tanto en condiciones de repetibilidad
como de precisión intermedia.
Si el rango del método es amplio deberá evaluarse
la precisión para distintos valores dentro del rango.

Veracidad (trueness)
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Grado de concordancia entre el promedio de un
número infinito de resultados y un valor de
referencia.
VIM 2008
Definición

Veracidad (trueness)
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Diferencia
Recuperación
A través de la medición del sesgo (bias), el cual se
puede expresar como:
xobs = valor medio observadoxref = valor de referencia
¿Cómo se evalúa?
δ

= xobs – xref
xref
100x%
xobsR =

Veracidad (trueness)
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Analizar varias veces un material de referencia
certificado (MRC) o una muestra/matriz fortificada
dentro del rango del método.
También puede evaluarse la veracidad comparando el
método con otro previamente validado o con un método
primario.
En cualquier caso conviene llevar a cabo algún test
estadístico para evaluar si existen diferencias
estadísticamente significativas.
¿Cómo se evalúa?

Rango
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Intervalo de concentraciones de analito
dentro del cual se puede considerar al
método validado
IUPAC
Definición

Rango
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
No hay criterio unificado con respecto al
sentido de este parámetro; mientras algunos
hacen referencia al rango lineal, otros hablan
de rango de trabajo, pero lo más importante
en una validación es establecer el rango de
concentraciones de analito en la muestra para
el cual el método está validado.

Robustez
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
La robustez de un procedimiento analítico es una
medida de su capacidad para mantenerse sin
cambios ante pequeñas pero deliberadas
variaciones en los parámetros del método, que
provee una indicación de su confiabilidad durante
el uso normal.
ICH
Definición

Robustez
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Se desafía al método realizando variaciones tanto
en la preparación de la muestra como en la
determinación analítica.
Se estudia el efecto de tales variaciones sobre los
parámetros previamente validados, en particular
sobre la precisión y veracidad del método.
Gran parte de esta información proviene del
desarrollo del método.
¿Cómo se evalúa?

Incertidumbre
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Definición
Parámetro, asociado con el resultado de una
medición, que caracteriza la dispersión de los
valores que podrían ser razonablemente
atribuidos al mesurando.
GUM

Incertidumbre
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
La incertidumbre puede evaluarse a partir de la
información obtenida en una validación, en particular
a partir de la precisión intermedia y de la veracidad
del método. (ver guías Eurachem 2nd ed. - 2000 y
Eurolab Technical Report Nº1/2007)
www.eurachem.org www.eurolab.org
Dependiendo de los criterios establecidos
previamente a la validación, este parámetro puede
servir para establecer el “fitness for purpose” del
método analítico.

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Requisito normativo
5.4.5.2 Validación de los métodos
El laboratorio debe validar los métodos no normalizados,
los métodos que diseña o desarrolla, métodos
normalizados empleados fuera del alcance previsto, así
como las ampliaciones y modificaciones de los métodos
normalizados, para confirmar que los métodos son aptos
para el fin previsto.
ISO/IEC 17025:2005
Requisitos generales para la competencia de los
laboratorios de ensayo y de calibración

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Requisito normativo
5.4.2 Selección de los métodos
... El laboratorio debe confirmar que puede aplicar
correctamente los métodos normalizados antes de
utilizarlos para los ensayos. Si el método normalizado
cambia, se debe repetir la confirmación...
verificación del
método
ISO/IEC 17025:2005
Requisitos generales para la competencia de los
laboratorios de ensayo y de calibración

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Requisito normativo
¿Qué es la verificación de un método?
La verificación de un método es el proceso de asegurar
que los parámetros de performance del método,
previamente establecidos, pueden ser alcanzados por
el laboratorio.
Los parámetros que típicamente se verifican, son la
precisión y la veracidad (trueness) del método. En
algunos casos puede ser necesario verificar también
algún otro parámetro, por ejemplo, el límite de
detección o la linealidad.

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Requisito normativo
Método
elegido
¿Ya
validado?
verificación
SI
validación
NO

Criterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Habitualmente los organismos de acreditación
establecen los requisitos indicados en las normas
de referencia y además suelen agregar
requerimientos propios.
La Guía para Validación de Métodos de Ensayo
(DC-LE-05) del OAA establece los criterios de
dicho organismo con respecto al grado de
validación requerido para los métodos, en función
de sus características.
Guía para Validación de Métodos de Ensayo del OAA

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
La guía establece que la validación es un proceso de tres
etapas:
1. establecimiento de los requisitos a cumplir, ya sea para
los parámetros de validación en forma individual o
conjunta.
2. determinación de los parámetros de validación.
3. evaluación de los resultados obtenidos para los
parámetros validados comparados con los requisitos
establecidos previamente.
Etapas del proceso de validación
Criterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
La guía también establece el alcance de la validación
dependiendo de las características del método:
1. método normalizado, ejecutado tal y como se establece
en el documento.
2. método normalizado modificado, en el cual se hayan
realizado cambios que puedan tener repercusión sobre la
calidad de los resultados; por ejemplo cambio en la
metodología de extracción, cambio en la matriz, extensión
del rango, equipamiento nuevo, etc.
3. método interno, elaborado por el laboratorio o sacado de
la bibliografía pero sin datos de performance del método.
Tipos de métodos
Criterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Criterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)
Método normalizado
Un método normalizado, en general, está totalmente validado
y por lo tanto el laboratorio, para demostrar que lo ejecuta
correctamente, sólo deberá verificarlo. Esto significa que
deberá demostrar que puede alcanzar la performance
adecuada para ciertos parámetros de validación.
Si bien no se pueden establecer criterios rígidos con respecto
a qué parámetros verificar, es habitual que se controlen la
precisión y la veracidad, en particular cuando estos
parámetros están indicados en las normas de referencia.
Tambíen se puede confirmar el método a través de la
participación en ensayos de aptitud y/o la elaboración de
gráficos de control.

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Criterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)
? métodos publicados por organismos de normalización
internacionales, regionales o nacionales, ej.:
ISO, EN, NM, ASTM, BS, DIN, IRAM, etc.
? métodos publicados por organizaciones reconocidas
en diferentes ámbitos, ej:
AOAC, FIL-IDF, EPA, SMW&W, USP, etc.
Método normalizado
En el marco de la acreditación de laboratorios se consideran
métodos “normalizados” a:

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Criterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)
Método normalizado modificado
Los métodos normalizados que han sido modificados deben
ser validados de tal forma de evaluar qué incidencia tienen
los cambios realizados sobre los distintos parámetros de
validación.
El laboratorio debe tener la competencia para evaluar qué
parámetros deberían revalidarse en función de los cambios
realizados.
Por ejemplos, cambios en el método de extracción podrían
afectar la selectividad por la posible presencia de
interferencias y también podría afectar la veracidad.

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Criterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)
Método normalizado modificado
Otros ejemplos:
Modificación Posible efecto sobre...
tipo de matriz selectividad, veracidad, LD, LQ
extensión del rango linealidad, precisión
cambio de analista precisión, veracidad
sistema de detección selectividad, linealidad; LD

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Criterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)
Método interno
Los métodos desarrollados internamente o los métodos
obtenidos de bibliografía que no presenten valores de
performance declarados, deberán ser validados
completamente.
El grado de validación y los parámetros a evaluar
dependerán de cada método.
En la tabla siguiente se pueden observar algunos
ejemplos:

?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
? ?
?
?
?
? ?
?
?
Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Criterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)
Incertidumbre
Robustez
Rango
Veracidad
Precisión
Límite de cuantificación
Límite de detección
Linealidad
Selectividad
Físico-
químico
Comp.
mayoritario
Análisis
de trazas
Método
Cualitativo
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
depende
-
depende

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de
la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025
Criterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)
Informe de validación
Un informe de validación, típicamente, debe contener la
siguiente información:
? Objetivo y alcance (matrices, concentraciones)
? Instrumentación y materiales utilizados
? Personal involucrado
? Protocolo de validación
? Resultados y conclusiones
? Procedimiento de ensayo
? Firma del/de los responsable/s de la aprobación

Muchas gracias por su atención!