4º Jornadas de Desarrollo e Innovación, Noviembre 2002 1


Influencia de la temperatura en la
microencapsulación de un oligopéptido altamente
hidrosoluble
Defain Tesoriero, M. V.; Murano, M.; Stratico, M.; Lagomarsino, A.
Centro de Investigación y Desarrollo en Química y Petroquímica (CEQUIPE)

INTRODUCCIÓN
El desarrollo de formulaciones de libera-
ción controlada de fármacos ha tomado un gran
impulso en esta última década. Los sistemas
basados en el polímero biodegradable ácido po-
li(D,L-láctico-co-glicólico), PLGA, especialmente
en la forma de microesferas inyectables, se en-
cuentran actualmente bajo investigación para el
desarrollo de nuevos productos de liberación
controlada de proteínas y péptidos farmacológi-
camente activos. (1)(2)(3)(4)
OBJETIVO
Nuestro objetivo es conseguir un producto
de liberación sostenida durante un mes. En el
presente trabajo se prepararon microesferas de
un péptido altamente hidrosoluble a diferentes
temperaturas de evaporación para estudiar su
influencia sobre la morfología y la cinética de li-
beración de las microesferas obtenidas.
MATERIALES Y MÉTODOS
Preparación de las microesferas. Las mi-
croesferas fueron preparadas según el procedi-
miento standard de doble emulsión y evaporación
del solvente(1). Brevemente, la fase interna (W1)
se preparó con una solución acuosa del péptido.
La fase orgánica consistió en una solución de
PLGA en diclorometano. Dicha solución se mez-
cló con la W1 y se obtuvo una emulsión utilizando
un homogeinizador (Heidolph 900X). La emulsión
obtenida se agregó a la fase externa (W2), una so-
lución de alcohol polivinílico (PVA) al 1% emulsio-
nando con un homogeinizador (Heidolph 900X).
La evaporación del diclorometano se realizó por
agitación vigorosa de la emulsión W1/O/W2. Las
microesferas se centrifugaron, lavaron, liofilizaron
y almacenaron a 4ºC. ( ver Fig 1)
Morfología y tamaño de partícula. La forma
y la superficie de las microesferas y tamaño de
partícula fueron analizados por microscopía elec-
trónica.
pa
Gelatina
W1/O PVA
W O
Homogeinización
Mezclado
Mezclado
H2O
PLGA
Mezclado
Cl2CH2
Homogeinización
Evaporación
Centrifugación
Lavados
Liofilización
Microesferas
Fig. 1. Diagrama de Flujo. Proceso de obtención de las
microesferas.
Contenido de la droga. Para la determina-
ción del contenido del oligopéptido en las mi-
croesferas se disolvieron las mismas en dimetil-
sulfóxido. Las muestras se cuantificaron por du-
plicado por HPLC en fase reversa en un equipo
Shimadzu LC-10. Las condiciones analíticas de
la HPLC fueron las siguientes: la cromatografía
fue realizada con una columna Lichrospher RP-
18 (Merck), utilizando un detector de longitud de
onda variable a 220 nm, la fase móvil utilizada

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fue metanol: acetato de amonio (0.25 M) 60:40,
el flujo fue de 0.8 ml/min.
Evaluación de la cinética de liberación in
vitro. Las microesferas (aprox. 50mg) fueron
suspendidas en 10 ml de buffer fosfato 150 mM
pH 7.4 adicionado con Tween 80 0.05 M y se in-
cubaron en un baño con agitación constante a
(36±1)ºC.(3) Se evaluó por duplicado la droga li-
berada a los 7, 14, 21 y 28 días con el método
analítico descripto anteriormente.
RESULTADOS
Se evaluó el perfil de liberación, la morfolo-
gía y la porosidad de microesferas obtenidas bajo
diferentes condiciones de evaporación del solven-
te. La tº de evaporación de la muestra 1 fue ma-
yor que la tº de evaporación de la muestra 2.
Podemos observar una mayor porosidad
en la muestra 1, según se aprecia en las fotomi-
crografías.
La muestra 2 posee un perfil de liberación
más aceptable que la muestra 1 ya que la libera-
ción se sostiene por cuatro semanas. ( ver Fig. 2)
Liberación in vitro
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 5 10 15 20 25 30
tiempo (días)L
ibe
ra
ció
n a
cu
mu
lad
a (
%)

Fig. 2. Curvas de liberación in vitro. Muestra 1 (? ).
Muestra 2 ( ? ).
CONCLUSIONES
Son muchas las variables que influyen en
la performance de este tipo de productos, entre
otras, el peso molecular del polímero(2) (3), el pH(4),
la temperatura de evaporación del solvente(5), la
relación fase interna/ fase externa (rel. fi / fe). (1)
La mayor temperatura de evaporación del
solvente forzaría la difusión del mismo al exterior
de la microesfera, esto produciría una mayor po-
rosidad que se traduciría en la liberación del prin-
cipio activo con una mayor relación cantidad de
péptido liberado/ tiempo. De esta forma, la libera-
ción de la droga se mantuvo en el tiempo en la
muestra donde la evaporación del solvente se
realizó a menor temperatura. Así, la temperatura
de evaporación del solvente podría ser una impor-
tante variable a controlar en este tipo de procesos.






Fotomicrografía - Muestra 1
Referencias

[1] Ogawa, Y., Okada, H., Yashiki, T., Shimamoto, T. 1988. A newtech-
niqueto efficiently entrap leuprolide acetate into microcapsules of poly-
lactic acid or copoly(lactic/glycolic) acid. Chemical and Pharmaceutical
Bulletin, 36, 1095-1103.
[2] Blanco, M.D., Alonso, M.J. 1997. Development and characterization
of protein-loaded poly(lactide-co-glycolide) nanoospheres. European
Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 43, 287-294.
[3] Ogawa, Y., Okada, H., Yashiki, T., Shimamoto, T. 1988. Controlled
release of leuprolide acetate from polylactic acid or copoly(lactic/glycolic)
acid microcapsules: Influence of molecular weight and copolymer ratio of
polymer. Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 36, 1095-1103.
[4] Tobío, M., Gref, R., Sánchez, A., Langer, R., Alonso, M.J.
1998.Stealth PLA-PEG nanoparticles as protein carriers for nasal ad-
ministration. Pharmaceutical Research. 15,2,270-275.
[5] Yi-Yan Yang, Hui-Hui Chia, Tai-Shung Chung. 2000 Effect of prepa-
ration temperature on the characteristics and release profiles of PLGA
microspheres containing protein fabricated by double-emulsion solvent
extraction/evaporation method. Journal of Controlled Release 69, 81-96









Fotomicrografía - Muestra 2
Para mayor información contactarse con:
María Victoria Defain Tesoriero – mvdt@inti.gov.ar



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