EFECTOS SINÉRGICOS DE COMBINACIONES DE
COMPUESTOS ANTIMICROBIANOS FRENTE A Listeria
innocua Y Staphylococcus aureus

Verdi1, MC; Eisenberg1,2, P.; Blanco Massani1, M.
1INTI Plásticos; 23iA-UNSAM.
mverdi@inti.gob.ar

Introducción

Listeria y Staphylococcus aureus son
microorganismos patógenos oportunistas [1, 2]
que han sido asociados a brotes de
enfermedades por consumo de alimentos
lácteos [3-5]. En los últimos años se han
planteado diferentes estrategias de
preservación en busca de reducir el impacto de
estos microorganismos en la industria de
alimentos.

Objetivo

El objetivo del presente trabajo fue estudiar la
combinación de diferentes compuestos
antimicrobianos permitidos en la industria
láctea, como una estrategia para combatir
Listeria y S. aureus.

Descripción

Microorganismos y condiciones de cultivo.
Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Listeria
innocua 7 (cedida por CERELA-CONICET)
fueron cultivados (18-24 h) a 37°C en medio
Mueller Hinton (MH). Hasta su uso las cepas
fueron mantenidas a -20°C en 15% de glicerol.

Agentes antimicrobianos. Se prepararon
soluciones madre de nisina (Nis) (Maxinis®,
Argentina), lactato de sodio (LS) (Sigma, EUA),
propionato de calcio (PC) (Inmobal Nutrer,
Argentina) y sorbato de potasio (SP) (Inmobal
Nutrer, Argentina) en buffer fosfato estéril
(KH2PO4-Na2HPO4 0,067M, pH 5,4).

Evaluación de la actividad antimicrobiana.
Se estudió la concentración inhibitoria mínima
(CIM) de los antimicrobianos utilizando el
método de difusión en agar [6]. Para estudiar el
efecto inhibitorio de antimicrobianos
combinados, se construyeron isobologramas
utilizando combinaciones binarias (Nis+SP,
Nis+PC, Nis+LS) y se calculó la curva aditiva
dada por la CIM de cada componente [7].
Combinaciones sub-inhibitorias fueron
evaluadas por el método de difusión en agar. Si
la inhibición es dada por un punto debajo de la
curva aditiva, la interacción es sinérgica; si la
inhibición es dada sobre la curva, la interacción
es aditiva; y si la inhibición es dada por encima
de la curva, la interacción es antagonista.

Resultados

Tanto L. innocua como S. aureus fueron
inhibidos por los antimicrobianos evaluados
(Nis, SP, PC y LS). Para inhibir el crecimiento
de L. innocua se requirieron concentraciones
menores de todos los antimicrobianos en
comparación con S. aureus, indicando una
mayor sensibilidad de L. innocua (Tabla 1).
Para ambos microorganismos se observó que
el orden de las CIM requeridas fue
LS>SP>PC>Nis, sugiriendo una mayor
capacidad inhibitoria por parte de Nis.

Antimicrobiano
Concentración Inhibitoria
Mínima (mg/ml) frente a
L. innocua 7 S. aureus ATCC 25923
Nis 1 3
SP 25 100
PC 12,5 25
LS 60 390

Tabla 1. CIM de los distintos antimicrobianos (pH 5,4)
evaluada frente a los microorganismos detallados.

Como se observa en la Figura 1, la
combinación de todos los antimicrobianos con
Nis, mostró un efecto sinérgico en la inhibición
de L. innocua y S. aureus (Fig 1 A y B). Esto
permitió una reducción a concentraciones sub-
inhibitorias, respecto a la CIM de cada
antimicrobiano por separado. En el caso de L.
innocua la combinación con Nis permitió
disminuir las cantidades de los antimicrobianos
en un 80% (Nis), 95% (LS), 99% (PC) y 83%
(SP). Para S. aureus, la reducción fue menor,
obteniéndose disminuciones de un 16,7%
(Nis), 58,3% (LS), 41,7% (PC) y 33,3% (SP).

Figura 1. Isobolograma representando el efecto de la
combinación de Nis con LS, PC o SP para la inhibición
de (A) L. innocua 7 y (B) S. aureus ATCC25923 (37°C,
pH 5,4). FIC = [concentración antimicrobiano en
solución/CIM].

Conclusiones

En conclusión, la combinación de SP, PC y LS
con Nis produjo un efecto sinérgico frente a L.
innocua 7 y S. aureus. Se requirieron
concentraciones sub-inhibitorias de los
antimicrobianos evaluados para lograr la
inhibición de los microorganismos. En el caso
de L. innocua, la inhibición se logró con
concentraciones más bajas que para S. aureus.
Estos resultados presentan una alternativa
promisoria para evitar el crecimiento de
microorganismos indeseados en la industria
láctea.

Bibliografía

[1] Bortolussi ( 2008). Public health: Listeriosis: A primer.
Cmaj, 179(8), 795–797.
[2] Landgraf & Destro (2013). Staphylococcal Food
Poisoning. Foodborne Infections and Intoxications, 389–
340.
[3] Silk (2013). Vital Signs: Listeria Illnesses, Deaths, and
Outbreaks - United States, 2009-2011. MMWR, Vol. 62.
[4] Carmo( 2002). Food poisoning due to enterotoxigenic
strains of Staphylococcus present in Minas cheese and raw
milk in Brazil. Food Microbiology, 19(1), 9–14.
[5] Johler (2015). Outbreak of staphylococcal food
poisoning among children and staff at a Swiss boarding
school due to soft cheese made from raw milk. Journal of
Dairy Science, 98(5), 2944–8.
[6] Pongtharangkul & Demirci (2004). Evaluation of agar
diffusion bioassay for nisin quantification. Applied
Microbiology and Biotechnology, 65(3), 268–272.
[7] Singh (2001). Synergistic inhibition of Listeria
monocytogenes by nisin and garlic extract. Food
Microbiology, 18(2), 133-139







































































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B