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TecnoINTI 2015 |
RESÚMENES DE LAS JORNA
D
A
S
Ambiente y Desarrollo Sustentable
ESTUDIO SOBRE LA CAPACIDAD DE FORMACIÓN DE BIOFILMS EN
BACTERIAS DEL SUELO: Análisis de Microorganismos de Referencia
A. Supanitsky1, D. Russo2, N. Vozza2, A. Zorreguieta2
1INTI Centro de Celulosa y Papel, 2 Fundación Instituto Leloir
asupanit@inti.gob.ar
1. Objetivo del proyecto 2. Descripción del proyecto
3. Logros del proyecto
Los biofilms ó biopelículas bacterianos son comunidades de
bacterias intercomunicadas, que crecen embebidas en una
matriz de exopolisacáridos adheridos a una superficie inerte ó a
un tejido vivo. El crecimiento en biofilm está directamente
relacionado con las condiciones del ambiente.
El estudio de la adherencia de los microorganismos a las
distintas superficies, tanto bióticas como abióticas, es central ya
que ésta condiciona la formación de biofilm, con sus conse-
cuencias en el área industrial (contaminación de un sistema por
la actividad microbiana del biofilm) y del medio ambiente
(biofertilización, biorremediación y tratamiento de efluentes)
Como objetivo general del trabajo buscamos correlacionar la
capacidad de formar biofilms en bacterias del suelo, con su
aptitud en el medio ambiente.
En el presente trabajo estudiamos como primera aproximación,
la capacidad formadora de biofilms de cepas de referencia sobre
una superficie abiótica (poliestireno), variando distintas
condiciones de cultivo in vitro, para luego abordar el estudio de
aislamientos autóctonos de bacterias provenientes de suelos
sometidos a distintas prácticas agrícolas de nuestro país.
De especial interés agrícola resulta el estudio de biofilms de rizobios
simbiontes de plantas leguminosas, por su capacidad fijadora de
Nitrógeno atmosférico, así como de otras rizobacterias promotoras
del crecimiento vegetal (PGPR) de los géneros Pseudomonas y
Burkholderia. Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 1.
Metodología
Se cuantificó la formación de biofilm mediante ensayo en
microplacas de poliestireno y tinción con Cristal Violeta. Dicho
ensayo se realizó variando distintas condiciones: medio de cultivo
(ricos como LB- TY y diferentes medios mínimos), cultivo estático ó
en agitación, densidad de la población inicial, tiempo de incubación.
Las bacterias fueron cultivadas a 28º C y 200 rpm, cuando
correspondió agitación, partiendo de distintas densidades
poblacionales: 0.001, 0.01, 0.1 (DO600nm.). Los tiempos de
incubación variaron de acuerdo al tipo de microorganismo (de
crecimiento lento ó rápido)
Ver figuras 1 a 3 para el ejemplo de B.japonicum USDA 110 en
cultivo estático.
En términos generales, podemos decir que la capacidad
formadora de biofilms varía considerablemente con:
1-la cepa, especie y género de rizobio ensayado
2-las condiciones de cultivo.
La agitación mecánica induciría una mayor capacidad de unión a
la superficie (poliestireno), situación bastante generalizada dentro
de los organismos estudiados. Se observó además que los
medios de cultivo mínimos favorecen la formación de biofilm.
En todos los casos estudiados encontramos alguna condición en
la cual las bacterias formaron biofilm en mayor ó menor medida
(biofilm como propiedad universal)  
Los resultados obtenidos fueron utilizados en el posterior análisis de
aislamientos de bacterias del suelo provenientes de distintos
ambientes de nuestro país.
•El presente trabajo se enmarca en un proyecto de tesis doctoral centrado
en el estudio de biofilms bacterianos.
•Cabe destacarse la colaboración permanente de los Centros de
Agroalimentos y de Biotecnología Industrial, en especial del Laboratorio de
Microbiología de alimentos a través de instalaciones, equipamiento y
asistencia en general
ESTUDIO SOBRE LA CAPACIDAD DE FORMACIÓN DE BIOFILMS EN BACTERIAS DEL SUELO
Análisis de Microorganismos de Referencia
Como objetivo general del trabajo buscamos correlacionar la capacidad de formar biofilms en bacterias del suelo, con su aptitud en el medio ambiente.
En el presente trabajo estudiamos como pri-mera aproximación, la capacidad formadora de biofilms de cepas de referencia sobre una superficie abiótica (poliestireno), variando dis-tintas condiciones de cultivo in vitro, para luego abordar el estudio de aislamientos autóctonos de bacterias provenientes de suelos sometidos a distintas prácticas agrícolas de nuestro país
MICROORGANISMO
VARIABLES DE CULTIVO BIOFILM
(OD 595nm)MEDIO AGITACIÓN ESTÁTICO ODi (600nm) TIEMPO
Bradyrhizobium japonicum USDA 138 Y manitol 0,2% SI NO 0,001 7 días 0,5
Bradyrhizobium japonicum USDA 110 Y manitol 0,2% NO SI 0,1 7 días 1,1
Bradyrhizobium japonicum SEMIA5080 Y manitol 0,2% SI NO 0,1 6 días 1,5
Bradyrhizobium japonicum SEMIA5079 Y manitol 0,2% SI NO 0,1 7 días 1,8
Mesorhizobium loti Ayac 1BII AB sacarosa 0,5% SI NO 0,1 3 días 0,4
Mesorhizobium loti MAFF 303099 Y manitol 0,2% SI NO 0,001 4 días 0,55
Rhizobium leguminosarum A34 Y manitol 0,2% SI NO 0,01 3 días 0,6
Rhizobium leguminosarum 3841 Y sacarosa 0,5% SI NO 0,1 4 días 0,4
Sinorhizobium meliloti Rm 1021 TY SI NO 0,1 2, 3, y 4 días 2,5
Sinorhizobium meliloti Rm 2011 TY SI NO 0,1 2 días 2,4
Pseudomonas fluorescens P1 M63 glucosa 0,2% CAA 0,5% SI NO 0,01 26 hs 8
Pseudomonas fluorescens P2 M63 glucosa 0,2% CAA 0,5% NO SI 0,1 45 hs 0,8
Burkholderia vietnamensis (BCC) GV M63 glucosa 0,2% CAA 0,5% SI NO 0,001 1 día 0,8
Burkholderia Cepacia Genomovar I M63 glucosa 0,2% CAA 0,5% NO SI 0,1 1 día 0,8
Tabla 1
Se cuantificó la formación de biofilm m diante ensayo en microplacas de poliestireno y tinción con Cristal Violeta.
Dicho ensayo se realizó variando distintas con-diciones: medio de cultivo (ricos como LB- TY y diferentes medios mínimos), cultivo estático
ó en agitación, densidad de la población inicial, tiempo de incubación.
Las bacterias fueron cultivadas a 28º C y 200 rpm, cuando correspondió agitación, partiendo de distintas densidades poblacionales: 0.001, 0.01, 0.1 (DO600nm.). Los tiempos de incubación variaron de acuerdo al tipo de microorganismo (de crecimiento lento ó rápido)
Formación de Biofilm en B.japonicum USDA 110- Odi
0,001 Estático
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
Y 4 días Y 7 días Y 10 días AMA 4
días
AMA 7
días
AMA 10
días
Ab
so
rb
an
cia
(5
95
n
m
) Biofilm
Crecimiento
Ab
so
rb
an
cia
(5
95
n
m
)
-El presente trabajo se enmarca en un proyecto de tesis doctoral centrado en el estudio de biof l s bacterianos.
-Cabe destacarse la colaboración permanente de los Centros de Agroalimentos y de Biotecnología Industrial, en especial del Laboratorio de Microbiología de alimentos a través de instalaciones, equipamiento y asistencia en general
Ab
so
rb
an
cia
(5
95
n
m
)
Ab
so
rb
an
cia
(5
95
n
m
)
Formación de Biofilm en B.japonicum USDA 110- Odi
0,001 Estático
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
Y 4 días Y 7 días Y 10 días AMA 4
días
AMA 7
días
AMA 10
días
Ab
so
rba
nc
ia
(5
95
nm
) BiofilmCrecimiento
Formación de Biofilm en B.japonicum USDA 110- Odi
0,01 Estático
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
Y 4 días Y 7 días Y 10 días AMA 4
días
AMA 7
días
AMA 10
días
Ab
so
rba
nc
ia
(5
95
nm
) BiofilmCrecimiento
Formación de Biofilm en B.japonicum USDA 110- Odi
0,1 Estático
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
Y 4 días Y 7 días Y 10 días AMA 4
días
AMA 7
días
AMA 10
días
Ab
so
rb
an
cia
(5
95
nm
) BiofilmCrecimiento
Figura 1: Población inicial 0,001 OD Figura 2: Población inicial 0,01 OD Figura 3: Población inicial 0,1 OD
Figura 3: Población inicial 0,1 OD